ICS 67.060 X 11 团 体 标 准 T/CIQA 148—2026 精米中谷蛋白 含量的测定 考马斯亮蓝 法 Determination of glutelin content in polished rice - Coomassie brilliant blue method 2026 -02-13 发布 2026 -02-13实施 中国出入境检验检疫协会 发布 全国团体标准信息平台 T/CIQA 148—2026 Ⅱ 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 -2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国出入境检验检疫协会进出口食品标准化技术委员会（ CIQA/TC10 ）提出并归口。 本文件起草单位：江苏苏中健康产业有限公司、南京海关动植物与食品检测中心、南京财经大 学、江苏苏中药业研究院有限公司。 本文件主要起草人：葛海涛、陆慧媛、丁超、丛旭东、王正俊、郭丽萍、王殿广、华雨薇、王泽 镕、张其荣、刘强、庄昕波、赵思琪 。 本文件知识产权归中国出入境检验检疫协会所有。任何单位或个人未经许可，不得以营利为目 的，印刷、出版、翻译、转发或复制全文或部分文字。 全国团体标准信息平台 T/CIQA 148—2026 1 精米中谷蛋白 含量的测定 考马斯亮蓝法 1 范围 本文件描述 了精米中谷蛋白 含量的考马斯亮蓝测定方法 。 本文件适用于精米中 谷蛋白含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文 件。 3.1 谷蛋白 glutelin 含于稻米中，溶于稀酸或稀碱 但不溶于纯水、中性盐溶液、乙醇的 储藏蛋白质的总称。 3.2 精米 polished rice 稻谷脱壳后形成的糙米经碾米加工，去除大部分糠层和胚芽后，主要以胚乳制成的成品粮。 4 方法提要 精米粉碎过筛后经去离子水、 5%氯化钠溶液、 70%乙醇洗涤，经 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液提取 后，得到纯度较高的谷蛋白，在 595 nm波长下采用考马斯亮蓝法 G-250测定谷蛋白含量。 5 设备和试剂 5.1 设备 5.1.1 粉碎机。 5.1.2 高速离心机：转速不低于 4000 r/min 。 5.1.3 恒温磁力搅拌器：可 控温度不低于 60℃。 5.1.4 紫外可见分光光度计：波长范围 190 nm-900 nm。 5.1.5 标准检验筛：孔径为 100目、120目。 5.1.6 具塞离心管： 10 mL、15 mL、100 mL。 全国团体标准信息平台 T/CIQA 148—2026 2 5.1.7 涡旋混匀仪。 5.1.8 分析天平：感量为 0.01 g、0.0001 g 。 5.1.9 恒温水浴锅。 5.2 试剂 除另有规定，所用试剂均为分析纯，试验用水需符合 GB/T 6682 中二级水的规定要求。 5.2.1 去离子水 5.2.2 石油醚。 5.2.3 氯化钠。 5.2.4 无水乙醇。 5.2.5 85%磷酸。 5.2.6 氢氧化钠。 5.2.7 考马斯亮蓝 G-250。 5.2.8 95%乙醇。 5.2.9 牛血清白蛋白： CAS:9048 -46-8，纯度大于等于 98.0%。 5.3 溶液配制 5.3.1 70%乙醇：量取 70 mL无水乙醇，加水稀释至 100 mL。 5.3.2 0.01%考马斯亮蓝 G-250溶液：称取 0.1000 g 考马斯亮蓝 G-250，溶于50 mL 95% 乙醇中，加入 85%的磷酸100 mL，用去离子水定容至 1 L，混匀过滤，于棕色瓶中保存。 5.3.3 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液：称取 0.16 g氢氧化钠溶于适量去离子水中，稀释至 100 mL。 5.3.4 5%氯化钠溶液：称取 5.00 g氯化钠溶于适量去离子水中，稀释至 100 mL。 5.4 标准溶液配制 0.1 mg/mL 标准蛋白质溶液：精密称取牛血清白蛋白 0.0100 g ，加0.04 mol/L 氢氧化钠溶液 溶解 并定容至 100 mL，超声5 min至溶解完全，即为 0.1 mg/mL 标准蛋白质溶液。 标准溶液建议现配现用， 或4℃下避光保存 1-3d。 6 分析步骤 6.1 样品的制备 使用粉碎机将精米样品粉碎后过 120目筛，过筛后的样品和石油醚按照 1:4（W/V）混合，室温下 脱脂6 h，弃去石油醚后，置于通风橱下过夜风干，收集粉末样品过 100目筛，于干燥皿中储存备用。 6.2 样品中谷蛋白的提取 6.2.1 去离子水洗涤 称取2.0 g脱脂过筛的样品粉末于 100 mL烧杯中，加入 40 mL去离子水，置于装有 60℃去离子水 的大烧杯中水浴加热，同时大烧杯置于恒温磁力搅拌器上搅拌 30 min，搅拌完成后转移至 50 mL离心 管内，6000 r/min 离心10 min，弃去上清液后重复提取 1次，沉淀备用。 6.2.2 5%氯化钠溶液洗涤 向上述含沉淀的离心管中分多次加 80 mL 5% 氯化钠溶液，涡旋 2 min至沉淀溶解分散后转移至 全国团体标准信息平台 T/CIQA 148—2026 3 100 mL烧杯内，烧杯 置于装有 60℃去离子水的大烧杯中水浴加热，同时大烧杯 置于恒温磁力搅拌器上 搅拌30 min，等量分装至 2个50 mL离心管内， 6000 r/min 离心10 min，弃去上清液，沉淀备用。 6.2.3 70%乙醇洗涤 向上述含沉淀的离心管中分多次加入 60 mL 70% 乙醇，涡旋 2 min至沉淀溶解分散后转移至 100 mL 烧杯内，烧杯 置于装有 60℃去离子水的大烧杯中水浴加热，同时大烧杯 置于恒温磁力搅拌器上搅拌 10 min，等量分装至 2个50 mL离心管内， 6000 r/min 离心10 min，弃去上清液，沉淀备用。 6.2.4 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液提取 向上述含沉淀的离心管中分多次加入 50 mL 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液，用玻璃棒将沉淀搅拌溶解 至无明显大颗粒沉淀时，涡旋 2 min后转移至 100 mL烧杯内，烧杯 置于装有 45℃去离子水的大烧杯中 水浴加热，同时大烧杯 置于恒温磁力搅拌器上搅拌 90 min，等量分装至 2个50 mL离心管内， 10000 r/min离心10 min，保留上清液，用考马斯亮蓝法测谷蛋白含量。 6.3 谷蛋白含量测定 6.3.1 标准曲线绘制 精密吸取 0.1 mg/mL 标准蛋白质溶液 0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，分置 于6支10 mL具塞离心管中，用 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液补至 1.0 mL，摇匀。每管分别加入 5.0 mL 考马斯亮蓝 G-250溶液，盖塞后上下倒转 5次混匀后放置 2 min，以0.04 mol/L 氢氧化钠溶液 1.0mL 与5.0mL考马斯亮蓝 G-250混合液（ 0号试管）作空白对照，用 1 cm光径比色皿在 595 nm波长下测量 吸光度值。以蛋白质含量为横坐标、吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，计算线性回归方程。牛血清白 蛋白工作溶液配制方法见表 1。 表1 牛血清白蛋白工作溶液配制表 管号 0 1 2 3 4 5 6 0.1 mg/mL 标准蛋 白质溶液（ mL） 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.04 mol/L 氢氧化 钠溶液（ mL） 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蛋白质含量（μ g） 0 10 20 40 60 80 100 6.3.2 样品溶液含量测定 精密吸取样品溶液 1.0 mL，放入10 mL一次性离心管中（每个样品设 3个平行管），加入 5.0 mL 考马斯亮蓝 G-250溶液，轻轻上下倒转 5次混匀，避免剧烈摇晃产生泡沫。静置反应 2 min后，以空白 管为参比，用 1 cm光径比色皿于 595 nm处测量吸光度值。 若样品吸光度超出 0.3-0.6范围，应将其稀 释适当倍数后重新测定，以保证数据稳定性。 最后根据标准曲线计算谷蛋白含量。 7 结果计算 样品中谷蛋白含量按式（ 1）计算： 全国团体标准信息平台