SN ICS07.100.30 CCS X 04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5874—2025 出口食品中嗜温乳酸菌计数方法 Method for the enumeration of mesophilic lactic acid bacteria in food for export (ISO 15214 : 1998 , Microbiology of food and animal feeding stuffs—Horizontal method for the enumeration of mesophilic lactic acid bacteriaColony-count technique at 30 ℃ ,NEQ) 以正式 2025-12-11发布 2026-07-01实施 中华人民共和国海关总署‧发布 以正式出版文本为准 SN/T 5874—2025 前言 起草。 本文件参考ISO15214：1998《食品与动物饲料微生物学嗜温性乳酸菌计数的水平方法 30℃菌 落计数法》起草，一致性程度为非等效。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国太原海关、中华人民共和国拱北海关、中华人民共和国青岛海关 以正式出版文本为准 SN/T5874—2025 出口食品中嗜温乳酸菌计数方法 1范围 本文件描述了食品中嗜温乳酸菌活菌计数的检验方法。 本文件适用于含嗜温乳酸菌的食品中嗜温乳酸菌的计数。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本 文件 GB4789.2 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 嗜温乳酸菌 在本文件规定的试验条件下，30° (pH5.7)上形成菌落的一类细菌。 4原理 食品样品经处理后，在pH为5.7的MRS平板上经30℃培养72h，所得到的菌落经过计数后计算 每克或每毫升样品中嗜温乳酸菌的数量。 设备和材料 5 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下。 5.1 高压灭菌器。 5.2 恒温培养箱30℃士1℃。 5.3 均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。 5.4 天平：感量0.001g。 5.52 水浴锅或者等效设备，47℃土2℃、100℃。 5.6 无菌玻璃平皿或一次性培养皿：直径90mm。 5.7 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 5.8 3pH计，最小显示值为0.01(25℃），测量值精确至土0.1。 SN/T5874—2025 6 培养基和试剂 6.1缓冲蛋白陈水：见附录A中的A.1。 6.2生理盐水：见A.2。 6.3 MRS培养基：见A.3。也可使用商品化即用型培养基。 7 样品制备 7.1 制备要求 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。 稀释液（缓冲蛋白陈水或生理盐水）在试验前应在30℃土1℃条件下，保温15min~30min。 7.2冷冻样品解冻 冷冻样品可先在2℃～5℃条件下解冻，时间不超过18h，也可在温度不超过45℃的条件解冻，时间 不超过15min。 7.3固体和半固体食品 以无菌操作称取25.0g样品，放入盛有225mL稀释液的无菌均质杯内，于8000r/min～10000r/min 均质1min～2min，制成1:10样品匀液；或放人盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍 打1min~2min制成1:10的样品匀液。 7.4液体样品 液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管或微量移液器吸取样品25mL放入盛有225mL稀释液 的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，或放人盛有225mL稀释液的无菌均质 袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1:10的样品匀液。 8操作步骤 8.1 样品的稀释 8.1.1用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL无菌稀释 液的试管中（注意吸管或微量移液器尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌吸管或微量移液器 反复吹吸使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。注意吹吸时动作要轻柔，避免产生气溶胶。 8.1.2制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。 8.1.3根据对样品的菌量估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液进行加样（液体样品可包括原 2个无菌平皿内作空白对照。 8.1.4及时将15mL～20mL已灭菌并冷却至47℃土2℃的MRS培养基倾注平皿中。小心将接种物与 培养基混合均匀，并使其凝固。样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。 8.2培养 待琼脂凝固后，翻转平板，30℃培养72h土3h。 2 SN/T58742025 8.3 菌落计数 般情况选取菌落数在15CFU～300CFU的平皿用于计数 注：用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位 (colony-formingunits,CFU)表示。 9 结果的表述 9.1 一般情况 选取菌落数在15CFU～300CFU的平皿用于计算。结果的计算和表述见GB4789.2计算方法 部分。 示例： 稀释度 第一稀释度（1:100) 第二稀释度(1:1000) 168,215 菌落数/CFU 14,25 ≥C 168+215+25 408 N= 19429 (n+0.1n)d(2+0.1×1)×10-2 0.021 四舍五人至两位有效数字后得出每克或每毫升样品中嗜温乳酸菌的数量为19000CFU或1.9X 10*CFU。 9.2 极端数值的估算 版 9.2.1如果最低稀释度的两个平板（液体样品指原液，其他样品指1：10的样品勾液）上的菌落数均小于 15CFU时，则按最低稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 9.2.2如果最低稀释度的两个平板（液体样品指原液，其他样品指1：10的样品匀液）上均无菌落生长，则 以小于1乘以最低稀释倍数计算。 9.2.3如果所有稀释度平板上的菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，结果按平均 菌落数乘以最高稀释倍数计算，其他平皿可记录为多不可计。 9.2.4若所有稀释度的平板菌落数均不在15CFU～300CFU，则以最接近15CFU或300CFU的平均 菌落数乘以稀释倍数计算。 10 结果与报告 根据菌落计数结果出具报告，报告单位用CFU/g或CFU/mL表示。 3