LST 6120-2017 粮油检验 植物油中角鲨烯的 测定 气相色谱法 doc版 仅供参考 X 04 LS 中华人民共和国粮食行业标准 LS/T 6120—2017 粮油检验植物油中角鲨烯的测定 气相色谱法 Inspection of grain and oilsDetermination of squalene in vegetable oil by gas chromatography 2017-09-15公布 2017- 09 － 15实施 国家粮食局 公布 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由国家粮食局提出。 本标准由全国粮油标准化技术委员会（SAC/TC270）归口。 本标准起草单位：国家粮食局科学研究院、国家林业局国有林场和林 木种苗工作总站、中纺粮油进出口有限责任公司、北京市营养源研究所、 中粮食品营销有限公司。 粮油检验植物油中角鲨烯的测定气相色谱法 范畴 本标准规定了气相色谱法测定植物油中角鲨烯含量的原理、试剂、仪 器、试样制备、操作步骤、结果表示和周密度等。 本标准适用于植物油中角鲨烯含量的测定。 本标准方法的检出限为5mg/kg。 规范性引用文件 下列文件关于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与周密度）第1部分： 总则与定义 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与周密度）第2部分： 确定标准测量方法重复性与再现性的差不多方法 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB/T15687动植物油脂试样的制备 原理 样品经氢氧化钾-乙醇溶液皂化、正已烷提取后，采纳气相色谱法，以 角鲨烷为内标测定植物油中角鲨烯的含量。 试剂 除非另有讲明，在分析中应使用分析纯试剂，水为GB/T6682举荐使 用的二级水。 氢氧化钾。 95%乙醇。 无水乙醇。 正已烷：色谱纯。 氢氧化钾-乙醇溶液（约1mol/L）：称取60g土0.1g氢氧化钾（4.1），加 入50mL的水进行溶解，然后用乙醇（4.2）稀释至1000mL，溶液应为无色 或浅黄色。 10%乙醇溶液：用量筒量取50mL乙醇（4.3）于500mL容量瓶中，用 水定容至刻度。 无水硫酸钠。 角鲨烷标准品：纯度≥98%。 角鲨烯标准品：纯度≥98%。 角鲨烷内标溶液：准确称取25mg（精确至0.0001g）角鲨烷标准品（4. 8）于25mL容量瓶中，加入少量正已烷（4.4），使其充分溶解后，用正己 烷（4.4）定容至刻度，摇匀，即配成1mg/mL角鲨烷内标溶液。 角鲨烯标准储备溶液：准确称取50mg（精确至0.0001g）角鲨烯标准 品（4.9）于50mL容量瓶中，加入少量正已烷（4.4），使其充分溶解后，用 正已烷（4.4）定容至刻度，摇匀，即配成1mg/mL角鲨烯标准储备液。 配制含30μg/mL角鲨烷内标的角鲨烯工作液：将角鲨烯标准储备液（4 11）用正已烷（4.4）稀释至浓度分别为2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、 20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的标准工作液，并在工作 液中加入适量的角鲨烷内标溶液（4.10），保证每个工作液中角鲨烷终浓度 为30μg/mL。 pH试纸:指示范畴1~14。 仪器 圆底烧瓶：带标准磨口的250mL圆底烧瓶。 回流冷凝管：具有与烧瓶（5.1）配套的磨口。 250mL分液漏斗：具用聚四氟乙烯旋塞。 恒温水浴锅。 涡旋振荡器。 分析天平：精度0.0001g。 旋转蒸发仪。 氮吹仪。 气相色谱仪：配FID检测器。 试样制备 按GB/T15687执行。 操作步骤 样品处理 称量：准确吸取300uL角鲨烷内标溶液（4.10）于250mL圆底烧瓶（5 1）中，在氮吹仪上吹干后，准确称取0.2g~2g样品（6）（精确至0.0001g） 于此烧瓶中。 皂化：于烧瓶（7.1.1）中加入50mL氢氧化钾-乙醇溶液（4.5）后，烧 瓶与回流冷凝管（5.2）连接好，在80℃恒温水浴锅（5.4）中皂化回流50 min，停止加热，从回流管顶部加入50mL水，取出烧瓶摇匀，冷却至室温。 提取：将烧瓶中的皂化液转移至250mL分液漏斗（5.3）中，用50mL 正已烷（4.4）分三次洗涤烧瓶，并将洗涤液倒入分液漏斗中，用力摇动分 液漏斗2min，倒转分液漏斗，并小心打开旋塞，间歇地开释压力，静置分 层，将下层皂化液转移至另一个250mL分液漏斗中，再用相同的方法，分 别用30mL、20mL正已烷（4.4）对皂化液再提取两次，将三次正已烷提取 液置于同一分液漏斗中。 洗涤：用25mL乙醇溶液（4.6）洗涤正已烷提取液三至四次，每次弃 去下层的乙醇水溶液，用pH试纸（4.13）检验直至下层流出液呈中性。 第一次用乙醇溶液洗涤时要轻摇，防止乳化，逐次振摇强度可增加。 如显现乳化层，可喷淋少量的无水乙醇。 浓缩：将洗至中性的正已烷提取液通过铺有约5g无水硫酸钠（4.7）的 滤纸滤入与旋转蒸发仪（5.7）配套的球形蒸发瓶中，再用约20mL的正已 烷冲洗分液漏斗及无水硫酸钠三次，并入蒸发瓶中，在40℃水浴中旋转蒸 发溶剂，待瓶中剩下约2mL正已烷时，取下蒸发瓶，赶忙放入氮吹仪（5 8）中吹干，最后用正已烷（4.4）溶解并定容至10mL，待测。 色谱参考条件 气相色谱柱：HP-5毛细管柱，柱长30m，内径0.32mm，膜厚0.25μ m; 载气：高纯氮气，纯度99.999%；恒压，16psi；分流比：1:10； 进样口温度：250℃；柱温采纳程序升温方式，以15℃/min的速率从1 60℃升温到220℃，保持2min，然后以5℃/min的速率升温到280℃，保持 20min；最后以5℃/min的速率升温到300℃，保持2min。 FID检测器：温度300℃，氢气流速40mL/min，空气流速450mL/min， 尾吹气流速30mL/min。 进样量：1.0μL。 也可采纳其他等效的毛细管柱或色谱条件。 标准曲线的制作 将含有30μg/mL角鲨烷内标的不同浓度角鲨烯标准工作溶液（4.12） 注入气相色谱仪中进行分析，记录角鲨烯和角鲨烷的峰面积。以二者峰面 积比为横坐标，以二者质量比为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线的斜率 即为角鲨烯和角鲨烷的校正因子f。 样品测定 将样品待测溶液（7.1.5）注入气相色谱仪中进行分析，记录样品中角 鲨烯和角鲨烷峰面积。按照样品测试溶液的角鲨烯和角鲨烷的峰面积比、 内标的质量及角鲨烯和角鲨烷的校正因子，运算出样品待测液角鲨烯的质 量。 如果样品测试溶液的角鲨烯和角鲨烷峰面积比未落在标准曲线范畴 内，应适当调整待测样品的称样质量，再重新进行测定。 结果表示 样品中角鲨烯的含量（X）按式（1）运算： 1000 (1) Asm 1000 式中： X一一样品中角鲨烯的含量，单位为毫克每千克（mg/kg)； A1一一样品中角鲨烯的峰面积； AS一一样品中内标角鲨烷的峰面积； mS一一样品中加入内标角鲨烷的质量，单位为微克（μg）； f一一角鲨烯和角鲨烷的校正因子； m一一样品质量，单位为克（g)。