SN 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN/T 0213.2-93 上海市技术益好造总研究所 登滤号QT966067 出口蜂蜜中杀虫胖残留量检验方法 水解-碘化-气相色谱法 Method for determination of chlordimeform residues in honey for export -Hydrolysis-iodination-gas chromatography 1993-06-04发布 1993-08-01实施 中华人民共和国国家进出口商品检验局‘发布 （京）新登字023号 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口蜂蜜中杀虫残留量检验方法 水解-碘化-气相色谱法 SN/T0213.2--93 Method for determination of chlordimeform residues in honey for export -Hydrolysis-iodination-gas chromatography 1主题内容与适用范围 本标准规定了出口蜂蜜中杀虫残留量检验的抽样、制样和气相色谱测定方法。 本标准适用于出口蜂蜜中杀虫（包括其代谢物)残留量的检验。 2抽样和制样 2.1检验批 以不超过1000件为一检验批。同-一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和 等级等。 2.2抽样数量 批量（件） 最低抽样数（件） 50以内 5 50~100 10 101~500 每增加100，增取5 501以上 每增加100，增取2 2.3抽样工具 2.3.1取样管：不锈钢管，长约115cm，直径约2.5cm。 2.3.2混样器：塘瓷桶（或杯）。 2.3.3单套杆：不锈钢制。 2.3.4样品瓶：500mL磨砂盖广口玻璃瓶。 2.4抽样方法 按2.2规定的抽取件数随机抽取，逐件开启。将取样管缓缓放入，吸取样品。如遇蜂蜜结晶时，则用 单套杆插到底，抽取样品。每件抽取样品不少于100g。将所取样品倾入混样器，混和均匀，装入清洁干 燥的样品瓶内。封口后，标明标记并及时送实验室。 2.5试样制备 对未结晶的样品，将其用力搅拌均匀；对有结晶析出的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水 浴中温热，间或摇荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。在融化时必须注意防止水分挥发。制备 好的试样置于样品瓶中，密封，并标明标记。 2.6试样保存 中华人民共和国国家进出口商品检验局1993-06-04批准 1993-08-01实施 SN/T 0213.2-93 制备的样品，在低温（0~5℃）下保存。 注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 3测定方法 3.1方法提要 杀虫及其代谢产物在分别用乙酸和氢氧化钠处理后可水解成4-氯邻甲苯胺。再用液-液蒸馏提取 器经水蒸气蒸馏将4-氯邻甲苯胺提取到异辛烷中。然后提取至盐酸溶液中，用碘溴乙酸溶液使4-氯邻 甲苯胺直接碘化，生成4-氯-6-碘邻甲苯胺。 碘代4-氯邻甲苯胺可用带电子俘获检测器的气相色谱仪测定。 ·3.2试剂和材料 所用水为蒸馏水或相当纯度的去离子水。所用试剂除特殊规定外均为分析纯。 3.2.1盐酸溶液：1mol/L。 3.2.2乙酸溶液：2mol/L。 3.2.3，氢氧化钠溶液：10mol/L。 3.2.4异辛烷：重蒸馏。 3.2.5 正己烷：重蒸馏。 ：碘化液：80mL冰乙酸加20mL饱和溴水，加入碘使之饱和。 3. 2. 6 3.2.7结晶碘。 3. 2. 8 ：无水亚硫酸钠。 3.2.9.无水硫酸钠：经650℃灼烧，冷却，盛于密封瓶中备用。 3.2.10杀虫标准贮备溶液：准确称取0.1010g杀虫滕纯品（纯度：99%），精确至0.1mg，用 1mol/L盐酸溶解并稀释至100mL（浓度为1.0mg/mL）。 3.2.114-氯邻甲苯胺标准贮备溶液：准确称取0.1010g4-氟邻甲苯胺纯品（纯度>99%），精确至 0.1mg，溶解在5mL乙醇中，并用1mol/L盐酸稀释至100mL，吸取1.0mL此溶液于100mL容量 瓶中，再用1mol/L盐酸稀释至刻度（浓度为10μg/mL）。 3.2.12担体：ChromosorbWHP（80~100筛目），气相色谱用。 3.2.13.固定液：OV-17及QF-1。 3.2.14氮气：纯度≥99.99%。 3.3仪器和设备 3.3.1141型液-液蒸馏提取器（见图）。 SN/T0213.2--93 上端装有长400m 的回流冷凝管 250ml 1000mL 液-液蒸馏提取器装配图 3.3.2震荡恒温水浴一台。 3.3.3气相色谱仪配备Ni63电子俘获检测器。 3.3.4＇旋转蒸发器。 3.3.5微量注射器：1μL，5μL，10μL。 3.4测定步骤 3.4.1水解 称取蜂蜜样品50g，放入1L硬质玻璃圆底烧瓶中。加350mL蒸馏水，几粒沸石，50mL2mol/L 乙酸，6g乙酸钠，装上回流冷凝管，电热套加热至沸腾后计时90min，停止加热。仍不取下回流冷凝管， 在室温下冷却15min，然后将圆底烧瓶放入冰水中继续冷却10min。 3.4.2水蒸气蒸馏提取 按下列步骤装配上液-液蒸馏提取器（见图）。加50mL异辛烷到250mL的圆底烧瓶中，然后接到 蒸馏提取器的高臂端（称异辛烷边）。在此之前先在提取器内加入蒸馏水至U形管二分之一处。在盛有 样品水解液的烧瓶中加入·80mL10mol/L氢氧化钠溶液，立即将此烧瓶接到蒸馏提取器的低臂端（水 边）。并将此烧瓶上的回流冷凝管转接至蒸馏提取器顶端（见图）。加热水边至沸腾后再加热异辛烷边。 控制两边的加热速率，以使冷凝下来的水和异辛烷的量相等，这时蒸馏提取器的毛细管中连续不断地形 成水相间的异辛烷珠滴大小和间隔相等；如此蒸馏操作1h。 3.4.3碘化 将全部异辛烷提取液倒入50mL分液漏斗中，用少量异辛烷分数次淋洗圆底烧瓶，与上述提取液 SN/T0213.2—93 合并。每次用3mL1mol/LHCl剧烈震荡2min，连续提取三次。收集4-氯邻甲苯胺的酸性提取液于 10mL的容量瓶中并定容。取出样品提取液2mL，于具有磨口塞的10mL刻度试管中。同时用4-氯邻 甲苯胺标准溶液（1μg/mL)配出系列浓度的标样，用1mol/LHCl稀释至2mL，都分装于具磨口塞的 10mL刻度试管中，标样与样品同时进行碘化。操作步骤如下：加少量磨细的结晶碘和1mL碘化液 （3.2.6），使溶液中碘呈饱和状态，于80℃震荡水浴中加热，不时取出试管加以剧烈震荡，使4-氮邻甲苯 胺碘化成4-氯-6-碘邻甲苯胺。30min后取出，在每个样品和标样的试管中加入约200mg粉末状亚硫酸 钠以还原过量的碘，此时溶液就变为无色或浅黄色。将此液转入50mL分液漏斗中，加5mL5mol/L 氢氧化钠溶液使溶液成为碱性。用5mL正已烷提取，剧烈震荡后弃去水相。收集正已烷提取液，并使 其经过无水硫酸钠柱干燥后盛于带磨口具塞的试管中，供气相色谱仪测定。 3.4.4测定 3.4.4.1色谱条件 i 一号色谱柱：玻璃柱1.1m×3mm，id； 5.0%（m/m)0V-17+5.0%(m/m)QF-1,Chrom0s0rbWHP，80~100筛目。 柱温：170℃； 气化室温度：220℃； 检测器温度：250℃； 氮气（纯度≥99.99%）：60mL/min。 在此色谱条件下，4-氟-6-碘邻甲苯胺的保留时间3.61min。 b.二号色谱柱：玻璃柱1.5m×3mm，id； 1.5%（m/m)OV-17+2.0%（m/m)QF-1,ChromosorbWHP，80~100筛目。 柱温：170℃； 气化室温度：220℃； 检测器温度：250℃； 氮气（纯度≥99.99%）：50mL/min。 在此色谱条件下，4-氯-6-碘邻甲苯胺的保留时间3.57min。 c..三号色谱柱：玻璃柱2.1m×3mm，id； 1.5%(m/m)0V-17+2.0%(m/m)QF-1,ChromosorbWHP，80~100筛目。 柱温：205℃； 气化室温度：235℃； 检测器温度：250℃； 氮气（纯度≥99.99%）：40mL/min。 在此色谱条件下，4-氯-6-碘邻甲苯胺的保留时间2.49min。 3.4.4.2色谱测定 在测定样品前，先制作标准曲线。对不同浓度的4-氮邻甲苯胺的标准溶液，按3.4.3步骤进行碘化 反应，用气相色谱仪进行测定，由测得的4-氯-6-碘邻甲苯胺的峰高与相应的4-氮邻甲苯胺的量作图。然 后对样品进行色谱测定，测得4-氯邻甲苯胺的峰高或峰面积，由所作标准曲线求得4-氯邻甲苯胺的量。 3.4.5空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行，求得空白值。 3.4.6结果计算 3.4.6.1由3.4.4.2步骤求得4-氯邻甲苯胺的量，按式(1)求得杀虫滕残留量。 A·F (1 ) 式中：X -蜂蜜试样中杀虫残留量，mg/kg； SN/T 0213.2—93 A一一色谱测定中每次注入的待测样液中的4-氯邻甲苯胺的量，ng； F一一由4-氟邻甲苯胺分子量换算为杀虫分子量的转换系数，其值为1.65； B—色谱测定中每次注入样液及其相当的蜂蜜样品量，mg。 : 3.4.6.2用外标法数据处理程序或按公式进行计算 在进行测定结果的计算时用与气相色谱仪相配套的数据处理机的外标法程序运算。 也可用式(2)进行计算： .D·F （2） h,.V..m 式中：X—蜂蜜中杀虫残留量，mg/kg； F——同3.4.6.1所述内容； 一称取的蜂蜜样品量，g； V。—色谱测定样液的最终定容体积，mL； 一蜂蜜蒸馏后盐酸提取液体积