ICS 65.020.20 B 05 山 DB14 西 省 地 方 标 准 DB 14/ T 1591—2018 草莓脱毒原原种苗制备技术规程 2018 - 01 - 10 发布 山西省质量技术监督局 2018 - 03 - 10 实施 发 布 DB14/ T 1591—2018 目  次 前言..................................................................................................................................................................... II 1 范围................................................................................................................................................................. 1 2 规范性引用文件............................................................................................................................................. 1 3 术语和定义..................................................................................................................................................... 1 4 外植体的选择................................................................................................................................................. 1 5 脱毒与检测..................................................................................................................................................... 1 6 茎尖的初代培养............................................................................................................................................. 2 7 组培苗的继代扩繁......................................................................................................................................... 2 8 组培苗的生根诱导......................................................................................................................................... 2 9 组培苗的驯化移栽......................................................................................................................................... 3 附录 A（资料性附录） 草莓脱毒原原种苗组培生产记录表....................................................................... 4 附录 B（资料性附录） 草莓脱毒原原种苗出圃登记表............................................................................... 5 I DB14/ T 1591—2018 前  言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山西省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：山西省农业科学院果树研究所。 本标准主要起草人：刘伟、樊新萍、王国平、陈冲、霍辰思、曹贵寿、史华平、尚勇进。 II DB14/ T 1591—2018 草莓脱毒原原种苗制备技术规程 1 范围 本标准规定了草莓脱毒原原种苗制备的术语和定义、外植体的选择、脱毒方法、茎尖的初代培养、 组培苗的继代扩繁、生根诱导及驯化移栽。 本标准适用于草莓脱毒原原种苗的制备。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 406 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 草莓脱毒原原种苗 脱毒的草莓组培苗移栽于无草莓病源、虫源的隔离区内成活的植株。 3.2 微茎尖脱毒 从匍匐茎上切取约0.2 mm茎尖分生组织接种至培养基中，分化出的组培苗可有效脱除病毒。 4 4.1 外植体的选择 选择标准 选取健壮、无病、开花结果正常的草莓植株作为母株，采集刚抽出且叶片未展开的匍匐茎作为外植 体材料。 4.2 采集时期 外植体宜在结果后期匍匐茎大量抽生阶段进行采集。 5 5.1 脱毒与检测 脱毒方法 1 DB14/ T 1591—2018 采用微茎尖脱毒法对草莓匍匐茎外植体材料进行脱毒处理。 5.2 病毒检测 依据NY/T 406 的要求执行。 6 茎尖的初代培养 6.1 初代培养基的选择 草莓茎尖初代培养的培养基为MS+ 0.5 mg/L～1.0 mg/L 6-BA，添加蔗糖30 g/L，调节培养基pH值 至5.8。 6.2 外植体消毒方法 切取匍匐茎顶端2 cm左右作为外植体进行消毒，流水冲洗0.5 h～2 h。在超净工作台下，用75%酒 精将外植体浸泡30 s，再用1.0%次氯酸钠消毒10 min～15 min或0.1%升汞溶液消毒5 min～10 min，无 菌水冲洗3～5次。所用消毒液与外植体体积的比例约为10:1。 6.3 茎尖分生组织切取 将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干水分。在解剖镜下用镊子将外植体顶端一层一层小心剥开，直至 露出茎尖分生组织部分，用锋利的解剖刀切取约0.2 mm的茎尖，接种于初代培养基中。 6.4 初代培养条件 初始接种的茎尖暗培养2 d，之后转置于常规培养条件下培养，培养温度25 ℃，光照强度3 000 Lux～ 5 000 Lux，光照时间每天14 h～16 h，相对湿度70%～75%。茎尖组织在该培养条件下生长约50～60 d 形成幼小无根植株后即可转至继代培养阶段。 7 组培苗的继代扩繁 7.1 继代培养基的选择 适宜草莓继代扩繁的培养基为MS + 0.1 mg/L～0.3 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA，添加蔗糖30 g/L， 调节培养基pH值至5.8。 7.2 继代过程的条件控制 草莓组培苗继代培养条件为：培养温度25 ℃，光照强度3 000 Lux～5 000 Lux，光照时间每天14 h～ 16 h，相对湿度70%～75%。继代培养每隔30～40 d 需继代一次。用于制备脱毒原原种苗的组培苗在继 代次数上应控制在7次以内，总继代培养时间不宜超过一年。即草莓组培苗应在每年重新制备。组培生 产过程应参照附录A.1进行详细登记。 8 组培苗的生根诱导 8.1 生根培养基的选择 诱导草莓生根的培养基为1/2MS + 0.1 mg/L NAA，添加蔗糖30 g/L，调节培养基pH值至5.8。 2 DB14/ T 1591—2018 8.2 生根过程的条件控制 用生长健壮且无明显变异的组培苗进行生根诱导。选择高度在2 cm以上的组培幼苗接种至生根培养 基进行生根。一般无根苗转接至生根培养基培养30 d左右即有多条根系产生，此时即达到驯化移栽的条 件。生根阶段的培养条件与继代过程相同。 9 组培苗的驯化移栽 9.1 组培苗的炼苗措施 将达到驯化移栽条件的组培苗移至温室，在自然光条件下炼苗7 d左右， 控制温室内温度＜ 30 ℃， 每天10：00～15：00需进行适当遮荫，避免日光曝晒。采用闭盖炼苗2 d、松盖炼苗2 d、开盖炼苗 3 d的方式使组培苗逐渐适应瓶外环境。 9.2 移栽基质的准备 3 移栽基质的成分配比草炭:蛭石:珍珠岩=4:3:1， 添加复合肥料（N:P2O5:K2O =20:10:20）200 g/m 。 移栽容器采用50 孔育苗穴盘，提前装好基质并浇透水备用。 9.3 9.3.1 组培苗移栽及栽后管理 移栽时间与方法 组培苗炼苗后叶片舒展变成深绿色且出现表皮毛，此时即可进行移栽。移栽适宜在晴天的傍晚或阴 天进行。移栽时需将幼苗用镊子小心地从瓶中夹出，用清水将根部的培养基清洗干净，然后将幼苗在75% 百菌清可湿性粉剂800～1 000倍液浸泡杀菌10 min。杀过菌的幼苗即可移栽至育苗穴盘，移栽时应注意 使根系保持舒展直立的状态，以利于新根的发生与幼苗的成活。 9.3.2 移栽后管理 移栽后将育苗穴盘整齐摆放于温室，然后需立即浇水，并搭建小拱棚外覆薄膜保湿。第一遍水需浇 透，以利于迅速发根，以后每天上下午需各浇水一次。移栽后需仔细观察幼苗状态，及时控制温室内环 境条件。移栽一周内温室内温度应控制在25 ℃～30 ℃，湿度70%以上，并且晴天的10：00～15：00需 特别注意遮阴。移栽一周后草莓植株挺立且有新叶发生则证明移栽成活。 9.4 脱毒原原种苗出圃 脱毒原原种苗达到3叶1心时即达到出圃标准。出圃的草莓脱毒原原种苗应参照附录B.1中的出圃登 记表进行严格登记，实行可追溯管理。 3 DB14/ T 1591—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 草莓脱毒原原种苗组培生产记录表 表A.