(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221072698 8.4 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 楚天思为康基因科技 （长 沙） 有限公 司 地址 410600 湖南省长 沙市宁乡市城郊街 道沩丰社区宁乡经开区金洲大道四段 197号 (72)发明人 胡璧梁　谭亮　江宏伟　 (74)专利代理 机构 湖南兆弘专利事务所(普通 合伙) 43008 专利代理师 陈魁 (51)Int.Cl. C12M 3/00(2006.01) C12M 1/38(2006.01) C12M 1/36(2006.01)C12M 1/34(2006.01) C12M 1/26(2006.01) C12M 1/24(2006.01) C12M 1/12(2006.01) C12M 1/04(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种细胞培 养方法及细胞培 养容器 (57)摘要 本发明公开了一种细胞培养方法， 先将一次 性容器本体载入微环境中， 往一次性容器本体中 加入细胞培养液， 随培养时间的增加， 逐次往一 次性容器本体中加入补充液， 一次性容器本体具 有至少两个不同面积的内侧面， 不同面积的内侧 面形成相应个用于培养不同体积细胞溶液的培 养面， 细胞溶液先承 载在小面积 培养面上进行培 养， 随着细胞溶液体积增加， 使细胞溶液承载在 大面积培养面上进行培养。 还公开了一种细胞培 养容器， 包括一次性容器本体， 一次性容器本体 有至少两个不同面积的内侧面， 不同面积内侧面 形成相应个用于培养不同体积细胞溶液的培养 面。 本细胞培养方法及细胞培养容器能满足积细 胞溶液培养需求， 提高细胞培养效果， 易实现自 动化生产， 生产效率高。 权利要求书1页 说明书6页 附图8页 CN 115058338 A 2022.09.16 CN 115058338 A 1.一种细胞培养方法， 先将洁净无菌的一次性容器本体(1)载入用于细胞培养的微环 境中， 往一次性容器本体(1)中加入细胞培养所需的细胞培养液， 随着培养时间的增加， 逐 次往一次性容器本体(1)中加入细胞培养所需的补充 液， 其特征在于： 所述一次性容器本体 (1)具有至少两个不同面积的内侧 面， 所述不同面积的内侧面形成相应个用于培养不同体 积细胞溶液的培养面(2)， 细胞溶液先承载在小面积的培养面(2)上进行培养， 随着细胞溶 液体积的增加， 转动一次性容器本体(1)使细胞溶液承载在大面积的培养面(2)上进行培 养。 2.根据权利要求1所述的细胞培养方法， 其特征在于： 所述细胞溶液在培养面(2)上培 养的过程中， 一次性容器本体(1)摇摆， 使一次性容器本体(1)中细胞溶液的细胞分布以及 温度均匀。 3.根据权利要求1所述的细胞培养方法， 其特征在于： 所述细胞溶液在培养的过程中， 定期将一次性容器本体(1)转动至采集位置， 静置指 定时长后， 采集细胞实时增长信息并监 控； 在细胞溶液达到预期浓度后， 一次性容器本体(1)转动至排上清液位置并静置指定时 长， 使得培养细胞充分沉淀， 再排出一次性容器本体(1)内的部分上清液， 以减少细胞溶液 的总体积。 4.一种细胞培养容器， 包括一次性容器本体(1)， 其特征在于： 所述一次性容器本体(1) 具有至少两个不同面积的内侧面， 所述不同面积的内侧面形成相应个用于培养不同体积细 胞溶液的培养面(2)， 所述一次性容器本体(1)上设有流道(121， 13)， 所述一次性容器本体 (1)上设有用于气体交换的透气膜(4)或气道(14)。 5.根据权利要求4所述的细胞培养容器， 其特征在于： 所述一次性容器本体(1)为刚性 的一次性培养瓶， 所述一次性容器本体(1)包括两个相对设置的端盖(12)， 端盖(12)上设有 旋转座(3)， 所述培养面(2)绕一次性容器本体(1)的旋转轴线平行设置形成多边形的围边 (11)。 6.根据权利要求5所述的细胞培养容器， 其特征在于： 所述流道(121)设于端盖(12)的 旋转轴线上， 并延伸至围边(11)上， 所述流道(121)数量至少为两条， 其中一条流道(121)用 于排出上清液。 7.根据权利要求6所述的细胞培养容器， 其特征在于： 所述流道(121)延伸至最小面积 的培养面(2)上， 所述一次性容器本体(1)上设有用于图像采集的观察窗(22)和/或用于取 样的取样口(23)。 8.根据权利要求4所述的细胞培养容器， 其特征在于： 所述一次性容器本体(1)为柔性 的一次性培养袋， 所述一次性容器本体(1)外设有定型套(5)， 所述定型套(5)用于将一次性 容器本体(1)固定以形成面积不同的培 养面(2)。 9.根据权利要求8所述的细胞培养容器， 其特征在于： 所述定型套(5)内设有多个固定 部(6)， 所述一次性容器本体(1)通过各固定部(6)可拆卸 地固定在定型套(5)内， 所述定型 套(5)的一侧设有安换口(7)， 所述定型套(5)于安换口(7)处设有密封盖(8)， 所述定型套 (5)上设有旋转 座(3)。 10.根据权利要求8或9所述的细胞培养容器， 其特征在于： 所述定型套(5)上设有加热 机构(9)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058338 A 2一种细胞培养方 法及细胞培养容器 技术领域 [0001]本发明涉及食品、 药品、 生命科学技术领域， 尤其涉及一种细胞培养方法及细胞培 养容器。 背景技术 [0002]细胞培养泛指所有体外培养， 其含义是指从动物活体体内取出组织， 置于模拟体 内生理环境等特定的体内条件下， 进 行孵育培养， 使之生存并生长。 常用的细胞培养袋由于 具有气体交换面积大， 有利于细胞的培养， 可以获得更多高质量的细胞， 并且可以直接进 行 显微观察、 监视细胞培养过程等多种操作， 保证全程无菌， 操作便捷等优点， 已经得到了广 泛的使用， 如图10所示， 在细胞培养的过程中， 较少细胞溶液作为细胞培养的初始 量平铺在 较大体积的细胞培养容器内会造成细胞溶液较快 的蒸发， 会导致培养基渗透压过高， 导致 细胞皱缩， 甚至引起细胞功能紊乱， 最终引起细胞凋亡； 而较多细胞溶液作为细胞培养的初 始量会带来细胞密度过低， 扩增速度 慢的状况， 在体外， 细胞的对数增殖需要细胞之 间的相 互作用， 当细胞密度较低时， 细胞增殖速度明显降低。 另外， 较多细胞溶液作为细胞培养的 初始量不但带来了成本的浪费， 而且也要求从病人体内采集更多的血 液， 也是不可 取的。 [0003]专利号201822257139.0一种新型细胞培养袋， 通过在培养袋中间设计密封槽和密 封条， 配合培 养袋上的排液口， 可实现培 养袋中培 养液一半的定量抽取。 [0004]专利号201510906678.0立体结构细胞培养袋， 该发明提出了一种立体结构的细胞 培养袋， 并集成试剂 接头、 传感器、 取样 袋， 相对于扁平的培养袋， 更有效的利用了封闭的培 养空间。 [0005]专利号202020480642.7， 可变体积细胞培养袋， 该发明提出了一种 细胞培养袋， 通 过袋体上 的分隔夹， 实现培养袋容积的可调， 以满足在较少细胞溶液作为细胞培养初始量 的培养需求， 同时满足细胞培 养过程中PH与DO的采集 监控。 [0006]专利号202110782370.5， 一种 大容量悬浮细胞培养瓶， 该发明通过在培养瓶上部 和下部安装透气膜， 以增 加培养过程中的透气量， 提升细胞培 养效果。 [0007]以上专利在解决细胞培养 的过程中提出了一部分解决方案， 但是存在以下不足： 难以满足体积不断增大的培养需求； 细胞培养效果不佳； 难以实现自动化生产； 生产效率 低。 发明内容 [0008]本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足， 提供一种能够满 足体积不断增 大的细胞溶液的培养需求， 提高细胞培养效果， 易实现自动化生产， 生产效率高的细胞培养 方法及细胞培养容器。 [0009]为解决上述 技术问题， 本发明采用以下技 术方案： [0010]一种细胞培养方法， 先将洁净无菌的一次性容器本体载入用于细胞培养的微环境 中， 往一次性容器本体中加入细胞培养所需的细胞培养液， 随着培养时间的增加， 逐次往一说　明　书 1/6 页 3 CN 115058338 A 3