(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210781547.4 (22)申请日 2022.07.05 (71)申请人 深圳无微 华斯生物科技有限公司 地址 518122 广东省深圳市坪 山新区坑梓 街道金辉路14号深圳市生物医药创新 产业园区1号楼5 05 (72)发明人 王国新　廖滔　陈敏文　 (74)专利代理 机构 北京专赢专利代理有限公司 11797 专利代理师 刘梅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6844(2018.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种恒温扩增试剂常温保存方法 (57)摘要 本发明涉及扩增试剂技术领域， 具体为一种 恒温扩增试剂常温保存 方法。 一种恒温扩增试剂 常温保存 方法， 包括以下操作步骤： 步骤一： 制备 反应混合液； 步骤二： 制备缓冲液； 步骤三： 加工 反应混合液； 步骤四： 切块； 本发明能够提供恒温 扩增试剂配制与干燥方法， 解决了恒温扩增试剂 无法常温保存的问题； 本发明的恒温扩增试剂常 温保存方法， 用于核酸恒温检测中， 使得恒温扩 增试剂能够实现常温长期保存， 降恒温扩增试剂 的运输储存成本， 同时为核酸POCT检测提供可靠 的技术手段； 本发明把反应混合液采用间歇式供 料的方式， 使其均匀分布在玻璃纤维膜上。 权利要求书2页 说明书7页 附图4页 CN 114854833 A 2022.08.05 CN 114854833 A 1.一种恒温扩增试剂常温保存方法， 包括以下操作步骤： 步骤一： 制备反应混合液； 准备酶混合物、 抗体、 引物、 探针、 聚乙二醇8000、 dNTP、 4 ‑羟 基邻苯二甲酸， 随后使 得酶混合物、 抗体、 引物、 探针、 聚乙二醇8 000、 dNTP、 4 ‑羟基邻苯二甲 酸之间均进行混合， 可制备 出反应混合液； 步骤二： 制备缓冲液； 准备4mM氯化镁、 50mM氯化钾、 20mM三羟甲基氨基 甲烷， 随后使得 4mM氯化镁、 5 0mM氯化钾、 20mM三羟甲基氨基甲烷之间混合， 可制备 出缓冲液； 步骤三： 加工反应混合液； 采用膜上加液装置， 把步骤一制备的反应混合液加入到玻璃 纤维膜上， 使得反应混合液浸 入在玻璃纤维膜上； 步骤四： 切块； 把步骤三中制备的玻璃纤维膜送入到烘干设备当中， 至于42℃烘干的模 式下， 对玻璃纤维膜进行烘干， 随后把烘干后的玻璃纤维膜进行切 块， 块的大小固定， 进一 步的把切块的玻璃纤维膜装 入PCR管中， 并进行密封， 常温保存。 2.根据权利要求1所述的一种恒温扩增试剂常温保存方法， 其特征在于： 所述步骤一中 引物浓度优选为1 μmol/L、 探针浓度优选为0.5 μmol/L， 聚乙二 醇8000浓度优选为2%， dNTP浓 度优选为1mM， 4 ‑羟基邻苯二甲酸浓度优选为0.01%， 所述反应混合液pH值为7.5， 酶混合物 由2U逆转录酶、 0.5U  DNA重组酶、 0.5U  DNA聚合酶、 0.25U单链DNA结合蛋白组成， 所述抗体 由0.1mg/mL逆转录酶抗体、 0.1mg/mL  DNA聚合酶抗体组成。 3.根据权利要求1所述的一种恒温扩增试剂常温保存方法， 其特征在于： 所述步骤二中 缓冲液pH值 为8.7。 4.根据权利要求1所述的一种恒温扩增试剂常温保存方法， 其特征在于： 所述膜上加液 装置包括有安置底座、 中部贯穿转轴、 两翼动力齿轮、 往复错开块、 上端输送架、 下压辊、 定 位连接框、 反应混合液储存筒、 筒 上穿轴与间歇供液杆， 其中中部贯穿转轴贯穿安置底座的 中部位置布置， 所述两翼动力齿轮对称套在中部贯穿转轴的两端， 其中往复错开块均匀固 定在两翼动力齿轮的一端， 所述上端输送架处于安置底座的上端， 其中下压辊固定在上端 输送架的上端一侧， 所述定位连接框对称 固定在上端输送架的中部两侧， 其中反应混合液 储存筒固定在两个所述定位连接框之间， 所述筒上穿轴贯穿反应混合液储存筒的下端布 置， 其中间歇供 液杆处于反应混合液储 存筒的内部下侧。 5.根据权利要求4所述的一种恒温扩增试剂常温保存方法， 其特征在于： 所述安置底座 与中部贯穿转轴之间通过转轴进行连接， 其中两翼动力齿轮处于上端输送架的下端， 所述 两翼动力齿轮与中部贯穿转轴之间采用螺钉连接， 其中两个两翼动力齿轮上的往复错开块 之间相互错开布置， 所述往复错开块为半球块， 其中反应混合液储存筒的两端分别与两个 定位连接框之间进行螺钉连接， 所述筒上穿轴与反应混合液储存筒之间通过转轴 连接， 其 中筒上穿轴的两端分别插入两个定位连接框的内部， 所述筒 上穿轴与间歇供液杆之 间进行 卡扣固定连接 。 6.根据权利要求5所述的一种恒温扩增试剂常温保存方法， 其特征在于： 所述上端输送 架的中部下侧对称布置固定连接的底部拉距杆， 其中底部拉距杆布置的形状为L形， 所述底 部拉距杆的下端一侧布置固定连接的被顶动块， 其中被顶动块处于同侧的两翼动力齿轮的 一侧， 所述上端输送架的框架内均匀布置活动连接的输送辊， 其中一个输送辊的两端对称 布置固定连接的联动侧柱， 所述联动侧柱贯穿上端输送架布置， 其中联动侧柱的一端套有 固定连接的随动齿轮， 所述 随动齿轮与两翼动力齿轮之间啮合布置， 其中随动齿轮的外侧权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114854833 A 2布置与联动侧柱固定连接的增距圆盘， 所述增距圆盘的一端靠外部布置通过转轴连接的转 动驱动杆， 其中转动 驱动杆的另一端通过转轴连接在筒上穿轴 上， 所述转动 驱动杆的一端 贯穿开设横向滑动槽 。 7.根据权利要求6所述的一种恒温扩增试剂常温保存方法， 其特征在于： 所述反应混合 液储存筒的下端中间位置贯穿布置固定连接的出液导向框， 其中出液导向框处于间歇供液 杆的下端， 所述出液导向框的下端布置固定连接的聚液框， 其中聚液框的下端中间位置贯 穿开设出液 口， 所述聚液框处于输送辊的上方， 其中聚液框的中部两侧对称贯穿开设指引 滑槽， 所述聚液框的内部下侧 放置有分液板， 其中分液板的上端两侧对称布置固定连接的 覆槽板。 8.根据权利要求7所述的一种恒温扩增试剂常温保存方法， 其特征在于： 所述覆槽板在 聚液框的内部对指引滑槽进行覆盖， 其中覆槽板的一端下侧布置固定连接的穿槽板， 其中 穿槽板贯穿指引滑槽布置， 所述穿槽板的一端贯穿布置上下插杆， 其中上下插杆上套有复 位弹簧， 所述上下插杆的上端布置固定连接的顶盖板， 其中顶盖板与出液导向框之间进行 固定连接， 所述穿槽板的另一端布置活动连接的调整杆， 其中调整杆 的另一端插入到横向 滑动槽的内部 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114854833 A 3