(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210562230.1 (22)申请日 2022.05.23 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO: M 2019474 2019.0 6.20 (71)申请人 安徽农业大 学 地址 230036 安徽省合肥市蜀山区长江西 路130号 (72)发明人 张应烙　宋涛　吴俊　项子琳　 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 17/14(2006.01) C12P 13/02(2006.01) C12P 13/00(2006.01) C07D 265/38(2006.01) C07F 15/02(2006.01)C07C 233/33(2006.01) C07C 233/25(2006.01) C07C 231/24(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A01N 43/84(2006.01) A01N 55/02(2006.01) A01N 37/22(2006.01) A01P 13/00(2006.01) A01P 3/00(2006.01) A01P 1/00(2006.01) C12R 1/465(2006.01) (54)发明名称 一类生物碱的提取方法与应用 (57)摘要 本发明涉及微生物工程技术领域， 具体涉及 从黑翅土白蚁体表链霉菌(Streptomyces   tanashien sis)BYF112的液体发酵物中提取的一 类生物碱化合物及其制备方法和应用。 具体而 言， 本发明公开11种生物碱类化合物， 其结构式 为： 其中化合物 1， 2， 3和7为新化合物。 该生物 碱类化合物能通过 保藏号为CCTCC  NO:M 2019474的链霉菌 (Streptomyces  tanashiensis)BYF112制备而 得。 该生物碱类化合物1、 2、 5、 6、 10、 11能作为抗癌药物， 具体为化合物2、 5、 6、 10、 11能抑制 人恶 性黑色素瘤细胞(A3 75)， 化合物1、 5、 6、 11能抑制 卵巢癌细胞(SKOV ‑3)生长， 化合物5、 6、 10、 11能 抑制人胃癌细胞(MGC ‑803)生长； 化合物11可作 为抗菌剂， 具体为能抑制四链球菌生长； 化合物5 和11可作为除草剂， 具体为能抑制稗草根的生 长。 权利要求书2页 说明书10页 附图25页 CN 115491322 A 2022.12.20 CN 115491322 A 1.链霉菌(Streptomyces  tanashiensis)BYF112， 该菌种于2019年6月20日在中国典型 培养物保藏中心保藏， 菌种保藏 号为CCTCC NO:M 2019474。 2.一类生物碱化 合物的制备 方法， 其特 征在于， 其制备 方法包括以下步骤： 1)、 将权利要求1所述的链霉菌BYF112接种到高 氏培养基上， 在160 ‑200rpm， 27.5～ 28.5℃条件下培 养2～3天作为种子液； 2)、 将种子液接种于高氏培养基中， 在160～200rpm、 27.5～28.5℃条件下发酵6.5～ 7.5天， 即得发酵 液； 3)、 将步骤2)所 得发酵液过滤， 滤液用乙酸乙酯萃取， 真空浓 缩干燥， 得粗浸膏； 4)、 将步骤3)所得粗浸膏进行硅胶柱层析分段， 采用二氯甲烷/甲醇进行梯度洗脱， 所 述二氯甲烷与甲醇的体积比依次为100:0、 100:1、 100:2、 100:4、 100:8； 从而分别得到5个洗 脱部分F1～F5； 5)、 将步骤4)所得组分F2浓缩 处理后， 在甲醇中重结晶， 得到化合物8； 对所得组分F3进 行同样的处理得到化合物11和组分F3 ‑1， 将组分F3 ‑1浓缩处理后， 在乙酸乙酯中重结晶分 别得到化合物5和10和组分F3 ‑1‑1， 将组分F3 ‑1‑1经凝胶柱层析分离， 得到化合物2； 对 所得 组分F4同样的处理得到化合物9和组分F4 ‑1， F4‑2， F4‑3， F4‑4， 将其中组分F4 ‑1和F4‑2合 并， 经凝胶柱层析分离分别得到化合物1、 6和7， 将其中组分F4 ‑3进行以二氯甲烷/甲醇为洗 脱剂的硅胶柱分离后在甲醇中重结晶， 得到化合物3， 将其中组分F4 ‑4进行以二氯甲烷/甲 醇为洗脱剂的硅胶柱分离后在甲醇中重结晶， 得到化合物 4； 所述浓缩条件为： 0.1个负压的 真空度， 45℃； 所述化合物1和2为紫红色粉末； 所述化合物3、 4和7为红色粉末； 所述化合物5 为橙黄色粉末； 所述化合物6为褐色粉末； 所述化合物8和10为无色晶体； 所述化合物9为黄 色粉末； 所述 化合物11为墨绿色粉末； 化 合物1‑11分别具有如下 结构式： 3.根据权利要求2所述的化合物1 ‑11的制备方法， 其特征在于， 发酵培养基的成份为/ L： KNO3 1g， K2HPO4·3H2O 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g,NaCl  0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,可溶性 淀粉20g， H2O 1.0L,pH 7.2。 4.如权利要求2所述的化合物1 ‑11的用途， 其特征是： 其中化合物1能抑制卵巢癌细胞 (SKOV‑3)的生长； 化合物2能抑制人恶性黑色素瘤细胞(A375)的生长； 化合物5 能抑制人恶权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115491322 A 2性黑色素瘤细胞(A3 75)、 卵巢癌细胞(SKOV ‑3)和人胃癌细胞(MGC ‑803)和稗草根的生长； 化 合物6能抑制人恶性黑色素瘤细胞(A375)、 卵巢癌细胞(SKOV ‑3)、 人胃癌细胞(MGC ‑803)和 稗草根的生长； 化合物11能抑制人恶性黑色素瘤细胞(A375)、 卵巢癌细胞(SKOV ‑3)、 人胃癌 细胞(MGC ‑803)、 四链球菌和稗 草根的生长 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115491322 A 3