(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210562920.7 (22)申请日 2022.05.23 (71)申请人 河南中医药大学 地址 450046 河南省郑州市郑东 新区金水 东路156号 (72)发明人 曾梦楠　解双双　张贝贝　王茹　 张钦钦　郑晓珂　 (74)专利代理 机构 郑州天阳专利事务所(普通 合伙) 41113 专利代理师 聂孟民 (51)Int.Cl. C07D 311/22(2006.01) C07D 311/30(2006.01) C07D 311/40(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种从箭叶淫羊藿中提取两个新异戊烯基 黄酮化合物的方法及应用 (57)摘要 本发明涉及从箭叶淫羊藿中提取两个新异 戊烯基黄酮化合物的方法及应用， 可有效解决从 箭叶淫羊藿中提取新异戊烯基黄酮化合物， 并用 于制备抗非小细胞肺癌的药物问题， 所述的化合 物为从箭叶淫羊藿中提取的两个新异戊烯基黄 酮化合物 Epimesatine  A和Epimesatine  I， 新异 戊 烯基黄酮化合物E pimesa tine  A 和 Epimesatine  I具有抗非小细胞肺癌活性， 可有 效用于制备抗非小细胞肺癌的药物， 实现在制备 抗非小细胞肺癌药物中的应用。 本发明原料丰 富， 制备方法易操作， 所得产品质量好， 使用效果 好， 可有效用于治疗非小细胞肺癌， 实现在制备 抗非小细胞肺癌药物中的应用， 开拓了箭叶淫羊 藿的药用价值和商业价值， 有显著的经济和社会 效益。 权利要求书1页 说明书7页 附图10页 CN 115043809 A 2022.09.13 CN 115043809 A 1.一种从箭叶淫羊藿中提取两个新异戊烯基黄酮化合物的方法， 其特征在于， 所述的 两个新异戊烯基黄酮化 合物为Epimesati ne A和Epimesati ne I， 结构式分别为： 制备方法包括以下步骤： (1)、 将箭叶淫羊藿20kg干燥粉碎， 用质 量浓度70％乙醇于45℃下回流提取3次， 每次 120L， 每次30min， 减压 回收溶剂， 得植物总浸膏2.6kg， 将总浸膏用3倍体积的蒸馏水混悬， 混悬液依次用石油醚、 二氯甲烷、 乙酸乙酯和正丁醇在室温下萃取4次， 每次15L， 每次2h， 分 别得石油醚浸膏、 二氯甲烷浸膏、 乙酸乙酯浸膏和正 丁醇浸膏； (2)、 将二氯甲烷浸膏0.5kg用过100 –200目筛的正相硅胶柱层析法分离， 用石油醚 –乙 酸乙酯溶剂体系梯度洗脱， 石油醚︰ 乙酸乙酯＝50︰ 1， 3L； 40︰ 1， 5L； 35︰ 1， 5L； 20︰ 1， 10L； 10︰ 1， 10L； 5︰ 1， 10L； 1︰ 1， 5L； 0︰ 1， 1L， 根据薄层色谱显色结果将相似部分合并， 得到8个极性段 组分Fr.A –H； (3)、 组分Fr.E  4.5g依次用过200 –300目筛的正相硅胶柱层析， 洗脱液为石油醚:乙酸 乙酯＝35︰ 1， 2L； 2 0︰ 1， 5L； 10︰ 1， 5L； 5︰ 1， 5L； 1︰ 1， 1.5L； 0︰ 1， 0.5L， Sepha dex LH20分离， 洗脱 液甲醇︰ 二氯甲烷＝1︰ 1， 3L， 再进行ODS法分离， 洗脱液甲醇︰ 水＝50︰ 50， 1L； 60︰ 40， 3L； 70︰ 30， 5L； 80︰ 20， 5L； 90︰ 10， 2L； 10 0︰ 0， 2L， 划分成7个组分Fr.E1 –E7； (4)、 组分Fr.E6  1.2g再次用ODS法分离， 洗脱液甲醇︰ 水＝60︰ 40， 1L； 70︰ 30， 3L； 80︰ 20， 3L； 90︰ 10， 1L； 100︰ 0， 1L， 经HPLC纯化， CH3CN–H2O体积比75︰ 25， 2mL/min， tR31.7 min， 得到化 合物Epimesati ne A； (5)、 组分Fr.F  67.0g用过200 –300目筛的正相硅胶柱层析， 洗脱液石油醚:乙酸乙酯＝ 35︰ 1， 20L； 2 0︰ 1， 50L； 10︰ 1， 50L； 5︰ 1， 50L； 1︰ 1， 20L； 0︰ 1， 10L， Sephadex  LH20分离， 洗脱液甲 醇︰ 二氯甲烷＝1︰ 1， 3L， ODS法分离， 洗脱液甲醇:水＝60︰ 40， 5L； 70︰ 30， 10L； 80︰ 2 0， 10L； 90︰ 10， 5L； 100︰0， 3L， 划分成7个组分Fr.F1 –F7； 利用ODS法将组分Fr.F3  2.8g分成4个组分 Fr.F3.1–3.4， 洗脱液甲醇:水＝60︰ 40， 2L； 70︰ 30， 5L； 80︰ 20， 7L； 90︰ 10， 3L； 100︰ 0， 1L； 组分 Fr.F3.3 1.1g经ODS法分离， 甲醇:水＝60︰ 40， 1L； 70︰30， 3L； 80︰20， 4L； 90︰ 10， 2L； 100︰0， 1L， 再HPLC纯化， C H3CN–H2O体积比85︰ 15， 2mL/mi n， tR23.4min， 得到化 合物Epimesati ne I。 2.权利要求1所述方法制备的新异戊烯基黄酮化合物Epimesatine  A和Epimesatine  I 在制备抗非小细胞A549 肺癌药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115043809 A 2一种从箭叶淫羊藿中提取两个新异戊烯基黄酮化合物的方 法 及应用 技术领域 [0001]本发明涉及医药， 特别是一种从箭叶淫羊藿中提取两个新异戊烯基黄酮化合物的 方法及应用。 背景技术 [0002]淫羊藿始载于 《 神农本草经》 ， 为小檗科植物淫羊藿、 箭叶淫羊藿、 柔毛 淫羊藿或朝 鲜淫羊藿的干燥地上部分。 箭叶淫羊藿是淫羊藿的药源植物之一， 具有温肾壮阳、 强筋骨、 祛风湿的功效， 为传统补肾助阳之佳品。 现代药 理学研究和临床实践表明， 箭叶淫羊藿及其 活性成分具有广泛的药 理作用， 特别是在加强阳气、 调节激素、 抗骨质疏松、 调节免疫功能、 抗氧化、 抗肿瘤、 抗衰 老、 抗动脉粥样 硬化和抗抑郁活性等方面作用显著。 根据文献报道， 箭 叶淫羊藿中的主要有效成分是总黄酮类， 其中最具代表性的为异戊烯基黄酮。 因此， 在 HPLC‑DAD特征吸收指导下， 综合运用各种现代色谱分离技术和波谱鉴定方法从箭叶淫羊藿 的二氯甲烷萃取部位发现两个新的异戊烯基黄酮类成分Epimesatine  A和Epimesatine  I。 活性评价发现，  Epimesatine  A和Epimesatine  I可以显著性杀死A549人非小细胞肺癌细 胞且对BEAS ‑2B正常人肺支气管上皮细胞无影响。 从箭叶淫羊藿二氯甲烷萃取部位发现 的 两个新异戊烯基黄酮类成分Epimesatine  A和Epimesatine  I， 有望成为抗非小细胞肺癌的 先导化合物， 为抗肿瘤药物的开发提供技 术支持， 但至今未 见有公开报导。 发明内容 [0003]针对上述情况， 为克服现有技术之缺陷， 本发明之目的就是提供一种 从箭叶淫羊 藿中提取两个新异戊烯基黄酮化合物的方法及应用， 可有效解决从箭叶淫羊藿中提取新异 戊烯基黄酮化 合物， 并用于制备抗非小细胞肺癌的药物问题。 [0004]本发明解决的技术方案是， 一种从箭叶淫羊藿中提取两个新异戊烯基黄酮化合物 的方法， 所述的化合物为从箭叶淫羊藿中提取的两个新异戊烯基黄酮化合物Epimesatine   A和 Epimesati ne I， 分子结构式为： [0005] [0006]其制备方法包括以下步骤： [0007](1)、 将箭叶淫羊藿干燥粉碎， 用乙醇回流提取， 减压回收溶剂， 得浸膏， 浸膏用蒸 馏水混悬， 再依次用石油醚、 二氯甲烷、 乙酸乙酯和正丁醇萃 取， 分别得石油醚浸膏、 二氯甲 烷浸膏、 乙酸乙酯浸膏和正 丁醇浸膏；说　明　书 1/7 页 3 CN 115043809 A 3