(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210565706.7 (22)申请日 2022.05.23 (71)申请人 广东天葆 堂健康科技产业有限公司 地址 528400 广东省中山市 火炬开发区中 山港社区得能东路10号之二 (72)发明人 石磊　赵子建　吴大明　刘玲　 朱爽　吴卓瑜　 (51)Int.Cl. A61K 36/258(2006.01) A61P 37/04(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A23L 33/105(2016.01) A23L 33/18(2016.01) (54)发明名称 一种类野山参组合物、 制备方法及在抗肿 瘤、 提升免疫力和抗衰老中的应用 (57)摘要 本申请公开了一种类野山参组合物及其制 备方法， 以及在抗肿瘤、 提升免疫力和抗衰老中 的应用。 该 组合物实现了普通人参的活性成分进 行分子重构， 获得了类似于野山参甚至含量高于 野山参的皂苷类成分， 以及十几种类似于野山参 相关蛋白片段的活性肽。 与天然野山参在有效成 分的丰富性、 以及各种成分的构成比例上高度接 近于野山参， 从而实现类似于野山参的综合疗 效。 该组合物见效快、 毒副作用小， 可长期服用， 是一种安全、 高效、 稳定、 制备工艺简单的药物和 保健食品， 适于工业化生产， 易于推广。 本申请为 提高免疫力、 抗肿瘤、 抗衰老的耐药性、 减 轻放化 疗毒副反应、 抗疲劳、 抗抑郁 的药品和食品提供 了一种新的原料与生产工艺。 权利要求书2页 说明书15页 附图15页 CN 114917264 A 2022.08.19 CN 114917264 A 1.一种类野山 参组合物的制备 方法， 其包括： 利用人参科恩氏菌、 耐热科恩氏菌、 青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌其中的至少两种作为 菌种， 以含有野山 参作为培 养物， 制得发酵 液； 收集所述发酵 液， 经过去菌、 甲醇回流 提取， 得到第一上清液； 将所述第一上清液 经过蛋白提取和硫酸铵沉淀处 理得到第二上清液和第二 沉淀物； 将所述第二上清液 经过酶解、 除盐和凝胶色谱纯化处 理， 得到第三 沉淀物； 将所述第二沉淀物和所述第三沉淀物混合， 冷冻干燥后即可得到所述类野山参组合 物。 2.根据权利要求1所述的制备 方法， 其中， 所述制得发酵 液的步骤具体包括： 分别制得人参科恩氏菌的种子液、 耐热科恩氏菌的种子液、 青春双歧杆菌的种子液和 嗜酸乳杆菌的种子液； 将所述人参科恩氏菌的种子液、 所述耐热科恩氏菌的种子液、 所述青春双歧杆菌的种 子液和所述嗜酸乳杆菌的种子液中的至少两种混合后， 接种至发酵培养基中， 于35℃、 80rpm恒温发酵5d， 即得发酵培 养液。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其中， 制得所述种子液的过程中使用了种子培养 基， 所述种子 培养基包含： 1.5％野山参粉、 2.5％蛋白胨、 2％葡萄糖、 0.25％磷酸氢二钠、 0.25％磷酸二氢钾、 0.32％磷酸氢二钾、 0.6％乙酸钠、 0.0 6％柠檬酸镁、 0.1％吐温80和0.0 5％柠檬汁。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其中， 所述发酵培养基包含12.5 ％(w/v)野山参粉、 3.5％(w/v)蛋白胨、 4.5％(w/v)葡萄糖、 0.55％(w/v)磷酸氢二钠、 0.55％(w/v)磷酸二氢 钾、 0.15％(w/v)柠檬酸铵、 0.6％(w/v)乙酸钠、 0.06％(w/v)硫酸镁、 0.02 3％(w/v)硫 酸锰、 0.1％(v/v)吐温80、 0.25％(w/v)脱氧胆酸和0.2％(w/v)维生素 K1， 用柠檬酸调节pH值 为6。 5.根据权利要求1所述的制备方法， 其中， “得到第一上清液 ”的步骤具体包括： 将发酵 液， 于8000rpm离心15min左右去掉菌体， 用甲醇热回流多次每次2h， 趁热抽滤， 滤液减压回 收浓缩至小体积， 即为第一上清液。 6.根据权利要求1所述的制备方法， 其中， “得到第二上清液和第二沉淀物 ”的步骤具体 包括： 向所述第一上清液中混入25％ 的BPP蛋白提取液和等体积的25％的Tris ‑饱和酚试剂， 混匀， 15000g、 4℃离心15mi n， 得到上层酚相和下层的第二 沉淀物； 向所述上层酚相中加入5倍体积过饱和硫酸馁 ‑甲醇溶液， ‑20℃过夜， 15000g、 4℃离心 5min， 取沉淀， 用预冷丙酮洗涤后， 再次15000g、 4℃离心5min， 加入适量RIPA  Lysis  Buffer， 震荡混匀后， 室温精置2h， 室温下20 000g离心30min， 取上清溶液， 即为第二上清液。 7.根据权利要求1所述的制备 方法， 其中， “得到第三 沉淀物”的步骤具体包括： 向所述第二上清液中加入20v/v％的变性剂和2v/v％的1mg/ml的DTT， 37℃恒温处理2h 后， 加入20m/v％的2 ‑氯乙酰胺， 室温下避光反应40min后， 加入7 ×缓冲Buffer用于稀释变 性剂， 以1:50(w/w)的酶对 蛋白质比例加 入1mg/mL胰 蛋白酶， 37℃恒温酶解24h即可得到酶 解液； 使用Sep‑Pak C18除盐柱进行样品除盐， 收集洗脱液， 采用凝胶色谱柱对冻干品进一步 纯化， 收集 不同馏分的洗脱液， 浓 缩后冷冻干燥， 得到的肽段冻干品即为第三 沉淀物。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114917264 A 28.一种类野山参组合物， 其中， 包含皂苷类成分和肽成分， 所述皂苷类成分包括Rb1、 Rb2、 Rc、 Rd、 Re、 Rf、 Rg1、 R ‑Rg2、 S‑Rg2、 S‑Rg3、 R‑Rg3、 Rg4、 Rg5、 Rg6、 S ‑Rh1、 R‑Rh1、 S‑Rh2、 R‑ Rh2、 Rh3、 Rh4、 Rk1、 Rk2、 Rk3； 所述肽成分包 含如SEQ ID NO.1～2所述的肽。 9.根据权利要求8所述的类野山参组合物， 其中， 所述肽成分还包含如SEQ  ID NO.3～ 12任一所述的肽。 10.权利要求1～7任一所述的制备方法制得的类野山参组合物、 或权利要求8或9所述 的类野山 参组合物在制备抗肿瘤制品和提高免疫力制品中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114917264 A 3